1. Pemulihan
●1. Keluarkan cryovial dari nitrogen cair, segera masukkan ke dalam bak air 37 derajat, dan kocok sedikit. Setelah cairan meleleh (sekitar 1-1.5 menit), keluarkan dan semprotkan sedikit alkohol dan taruh di meja kerja yang sangat bersih.
●2. Aspirasi suspensi sel di atas ke dalam tabung sentrifus 15 ml yang diisi dengan media 10 ml (cuci tabung kriopreservasi dengan media untuk membersihkan semua sel yang menempel di dinding), dan sentrifugasi pada 1000 rpm selama 5 menit.
●3. Tuang supernatan dan tambahkan 1ml media untuk menangguhkan sel. Disedot ke dalam cawan petri berukuran 10 cm yang berisi 10 ml media biakan dan dikocok perlahan bolak-balik agar sel-sel dalam cawan petri terdistribusi secara merata.
●4. Beri label jenis dan tanggal sel, nama pembudidaya, dll., Dan letakkan di inkubator CO2 untuk budidaya. Setelah sel menempel pada dinding, ganti medianya.
●5. Ganti media setiap 3 hari sekali.
2. Melewati
●1. Bagian saat cakupan sel dalam cawan kultur mencapai 80 persen -90 persen .
●2. Aspirasi media asli.
●3. Tambahkan trypsin yang sesuai (cukup untuk menutupi sel) dan cerna selama 1-2 menit.
●4. Setelah sel-sel dibulatkan, tambahkan media yang mengandung serum dengan volume yang sama untuk menghentikan pencernaan.
●5. Gunakan pipet untuk menangguhkan sel dengan pemipetan.
●6. Aspirasi sel ke dalam tabung sentrifus 15 ml dan sentrifus pada 1000 rpm selama 5 menit.
●7. Tuang supernatan, tambahkan media 1-2ml, dan tiup selnya.
●8. Pindahkan sel ke beberapa cawan tergantung jenis selnya. Umumnya terdapat 5 sel kanker dan 3 sel normal. Terus berkultivasi.
3. Kriopreservasi Digest the cells and centrifuge (ibid.). Tangguhkan sel dengan larutan pembekuan yang telah disiapkan, dan distribusikan ke dalam cryovial yang telah disterilkan, diamkan selama beberapa menit, dan tunjukkan jenis sel dan tanggal kriopreservasi. 4 derajat selama 30 menit, -20 derajat selama 30 menit, -80 derajat semalaman, lalu ditempatkan dalam nitrogen cair untuk disimpan. Persiapan larutan kriopreservasi: 70 persen media lengkap ditambah 20 persen FBS ditambah 10 persen DMSO. DMSO harus ditambahkan perlahan-lahan, sambil dikocok sambil menetes.