Kita perlu mencuci kit delapan tabung PCR setelah digunakan. Ada beberapa cara untuk membersihkan PCR Octal Kit. Apa yang harus saya perhatikan saat menggunakannya?
Prinsip metode eksperimental: Membran silika gel mengikat DNA dalam kondisi garam tinggi, dan terpisah dari DNA dalam kondisi rendah garam. Primer, mononukleotida, enzim, minyak mineral, ion garam, dll dipisahkan dalam larutan pencuci yang mengandung DNA karena tidak memiliki sifat yang mirip dengan DNA.
Bahan eksperimental: produk PCR, reagen, kit, kit pembersih PCR, instrumen, bahan habis pakai, 96-pelat persiapan DNA sumur, 96-pelat sumur dalam, 96-pelat berbentuk V sumur
1. Pabrikan delapan tabung PCR berbicara tentang komposisi, penyimpanan, dan stabilitas kit
1. Instruksi, bahan habis pakai: 96-pelat preparasi DNA sumur, 96-pelat sumur dalam 1,6ml sumur, 96-pelat berbentuk V sumur.
2. Buffer PCR-A: larutan pengikat DNA. Simpan dalam keadaan tertutup rapat pada suhu kamar. Jika presipitasi terjadi, itu harus dilarutkan dalam bak air hangat pada 65 derajat dan didinginkan ke suhu kamar sebelum digunakan.
3. Buffer konsentrat W2: keluarkan larutan garam. Sebelum digunakan, tambahkan etanol ke volume yang ditentukan pada botol, aduk rata, dan simpan pada suhu kamar. Etanol 100 persen atau etanol absolut 95 persen dapat digunakan.
4. Eluen: 2,5 mM Tris-HCl, pH 8,5, disimpan dalam keadaan tertutup rapat pada suhu kamar.
2. Produsen tabung delapan-pasangan PCR berbicara tentang langkah-langkah operasi
Pengguna dapat memilih tekanan negatif atau sentrifugasi.
A. Metode tekanan negatif
1. Hubungkan perangkat tekanan negatif dengan benar, letakkan 96-pelat persiapan DNA sumur pada perangkat tekanan negatif; tambahkan 3 kali buffer PCR-A ke PCR, pencernaan enzim, pelabelan enzim atau larutan reaksi sekuensing (jika buffer PCR-A kurang dari 100 ul, tambahkan 100 ul); aduk rata dan pindahkan ke 96-pelat preparasi DNA sumur, hidupkan dan sesuaikan tekanan negatif ke -25-30 inci Hg, dan perlahan-lahan aspirasi larutan di dalam piring.
2. Tambahkan 0.3 ml buffer W2 dan serap larutan. Cuci dua kali dengan 0.3 ml buffer W2 dengan cara yang sama.
Konfirmasikan penambahan etanol absolut ke volume konsentrasi Buffer W2 yang ditunjukkan pada botol reagen.
3. Pertahankan tekanan negatif dan ekstrak 96-pelat preparasi DNA sumur selama 10 menit.
4. Giling 96-pelat preparasi DNA sumur 6 kali pada jaringan fibrosa panjang dengan tabung drainase menghadap ke bawah.
5. Tempatkan 96-pelat preparasi DNA sumur di atas 96-pelat berbentuk V sumur, tambahkan 25-30ul air atau elusi ke tengah membran, dan diamkan selama 1 menit pada suhu kamar. DNA dielusi dengan sentrifugasi pada 3 000 xg selama 5 menit.
B. Sentrifugal
1. Tambahkan 3 volume Buffer PCR-A (jika Buffer PCR-A kurang dari 100 ul, tambahkan 100 ul) ke PCR, digesti, pelabelan enzim atau reaksi sekuensing; campur dan transfer ke 96-DNA sumur di 96-piring persiapan sumur. Tempatkan pelat preparasi DNA dalam 96-piring sumur dalam 1,6 ml, sentrifus pada 1000 xg selama 1 menit, dan buang filtratnya.
2. Dalam cawan preparasi DNA 96-well, tambahkan 0.3 ml buffer W2, sentrifus pada 1000×g selama 1 menit, dan buang filtratnya. Cuci kembali dengan cara yang sama dengan 0,3 ml buffer W2. Konfirmasikan penambahan etanol absolut ke volume konsentrasi Buffer W2 yang ditunjukkan pada botol reagen.
3. Tempatkan 96-pelat preparasi DNA sumur di dalam pelat sumur dalam 96-sumur 1,6ml dan sentrifus pada 3 000×g selama 10 menit.
4. Tempatkan 96-pelat preparasi DNA sumur di 96-pelat bawah berbentuk V yang bersih, tambahkan 25-30ul air atau elusi ke tengah membran, dan diamkan selama 1 menit pada suhu kamar. DNA dielusi dengan sentrifugasi pada 3 000 xg selama 5 menit.
Produsen tabung oktal PCR berbicara tentang hal-hal yang perlu diperhatikan:
1. Pemanasan eluen atau air hingga 65 derajat dapat membantu meningkatkan efisiensi elusi.
2. Molekul DNA bersifat asam, direkomendasikan untuk disimpan dalam 2,5 mM Tris-HCl, pH 8,5 eluat.