Seringkali ada masalah dalam satu atau lain jenis dalam proses kultur sel. Jangan remehkan kultur sel, tapi mengandung pertanyaan universitas. Dengan berkomunikasi dengan pengguna, Anda akan menemukan banyak masalah yang bisa dihindari. Berikut ini adalah umum dalam proses kultur sel. Menganalisis penyebab kelainan.
cawan petri
1. Sel biakan tidak menempel pada dinding
kemungkinan alasan
1. Pencernaan tripsin yang berlebihan;
2. Kontaminasi mikoplasma;
3. Nilai pH media terlalu basa (dekomposisi NaHCO3);
4. Penuaan sel;
5. Konsentrasi awal sel yang diinokulasi terlalu rendah atau terlalu tinggi.
Larutan
1. Mempersingkat waktu pencernaan tripsin atau mengurangi konsentrasi tripsin;
2. Isolasi biakan dan deteksi mikoplasma. Bersihkan dudukan atau inkubator. Jika kontaminasi mikoplasma ditemukan, buang kulturnya;
3. Gunakan larutan asam asetat steril untuk mengatur pH atau isi dengan CO2 steril;
4. Aktifkan sel konservasi baru;
5. Sesuaikan konsentrasi sel terinokulasi yang optimal.
2. Pengelompokan sel suspensi
kemungkinan alasan
1. Media biakan mengandung ion kalsium dan magnesium;
2. Kontaminasi mikoplasma;
3. Pencernaan berlebih oleh protease menyebabkan lisis sel;
4. Kontaminasi DNA.
Larutan
1. Cuci sel dengan larutan garam seimbang bebas kalsium dan magnesium, dan tiup dan hisap dengan lembut
2. Sel memperoleh suspensi sel tunggal;
3. Pisahkan biakan dan deteksi mikoplasma;
4. Perawatan DNAsel sel.
3. Sel biakan tumbuh lambat
kemungkinan alasan
1. Karena penggantian media kultur atau serum yang berbeda;
2. Beberapa komponen yang diperlukan untuk pertumbuhan sel dalam media biakan, seperti glutamin atau faktor pertumbuhan, telah habis atau kurang atau telah dihancurkan;
3. Terdapat sedikit kontaminasi bakteri atau jamur pada biakan;
4. Penyimpanan reagen yang tidak tepat;
5. Konsentrasi awal sel yang diinokulasi terlalu rendah;
6. Sel telah menua;
7. Kontaminasi mikoplasma.
Larutan
1. Bandingkan komposisi media baru dan media asli, bandingkan serum baru dan serum lama untuk mendukung percobaan pertumbuhan sel, dan biarkan sel secara bertahap beradaptasi dengan media baru;
2. Ubah menjadi media biakan yang baru disiapkan, atau tambahkan glutamin dan faktor pertumbuhan;
3. Gunakan media biakan bebas antibiotik untuk biakan, jika ditemukan terkontaminasi, buang biakan tersebut;
4. Serum harus disimpan pada suhu -10 hingga -20 derajat . Media kultur harus disimpan pada 2-8 derajat dalam gelap. Media biakan lengkap yang mengandung serum harus disimpan pada 2-8 derajat dan harus digunakan dalam waktu 1 minggu;
5. Meningkatkan konsentrasi awal sel yang diinokulasi;
6. Ubah ke sel konservasi baru;
7. Isolasi biakan dan deteksi mikoplasma. Bersihkan dudukan dan inkubator. Jika kontaminasi mikoplasma ditemukan, buang kulturnya.
Keempat, sel yang dikultur tumbuh dengan buruk
kemungkinan alasan
A. Keadaan sel itu sendiri
1. Jumlah saluran sel besar, dan sel menua;
2. Jumlah inokulasi sel: jumlah inokulasi terlalu rendah, pertumbuhan sel lambat;
3. Sel-sel lewat terlambat: keracunan sel, yang mempengaruhi pertumbuhan sel setelah lewat;
4. Waktu pencernaan tripsin terlalu lama atau terlalu singkat: jika waktunya terlalu lama, sel-sel akan mati; jika waktunya terlalu singkat, sel tidak sepenuhnya terpisah menjadi kelompok, dan sel mati;
5. Kriopreservasi dan pemulihan sel: pembekuan lambat dan lisis instan.
B. Polusi
1. Kontaminasi mikoplasma;
2. Kontaminasi jamur.
C, media biakan atau serum
1. Tidak ada validasi sebelum penggantian serum atau media;
2. Apakah media yang dipilih cocok;
3. Apakah penyiapan media sudah tepat;
4. Apakah persiapan media sudah akurat.
D.mengolah lingkungan
1. Apakah suplai CO2 normal?
2. Suhu inkubator atau pengocok dikontrol dengan baik.
Larutan
Menurut empat kemungkinan alasan di atas, buatlah solusi yang ditargetkan
1. Perhatikan keadaan sel: seperti jumlah saluran, jumlah inokulasi, dll.;
2. Hindari polusi (gunakan serum biasa, legal dan dapat dilacak);
3. Gunakan serum atau media yang sesuai, sebaiknya diverifikasi;
4. Perhatikan lingkungan laboratorium.
Kemungkinan penyebab kematian sel dalam kultur
1. Tidak ada CO2 di dalam inkubator;
2. Suhu di dalam inkubator berfluktuasi terlalu banyak;
3. Sel rusak selama kriopreservasi atau pemulihan;
4. Tekanan osmotik media kultur salah;
5. Akumulasi metabolit toksik dalam media kultur.
Larutan
1. Mendeteksi CO2 di dalam inkubator;
2. Periksa suhu di dalam inkubator;
3. Ambil spesies sel baru yang diawetkan;
4. Deteksi tekanan osmotik media biakan;
5. Ubah menjadi media kultur segar;