Seperti yang kita semua tahu, jenis sel yang dibiakkan di laboratorium secara kasar dapat dibagi menjadi dua jenis: sel yang melekat dan sel suspensi, dan hanya beberapa jenis sel yang ada di kedua keadaan tersebut.
Sel suspensi mengacu pada jenis sel yang dapat tumbuh dalam keadaan tersuspensi dalam media tanpa bergantung pada penyangga, seperti limfosit dan sebagian besar sel yang berasal dari sistem darah. (seperti sel leukemia tikus WEHI-3, sel leukemia manusia K-562, HL-60). Dalam industri, semakin banyak sel yang melekat telah didomestikasi dan dibiakkan dalam suspensi penuh. Saat ini, sel SP2/0, NS0, CHO, BHK dan HEK293 terutama digunakan dalam industri, dan terutama digunakan untuk produksi protein rekombinan; sel pasase yang biasa digunakan dalam produk biologi veteriner terutama mencakup sel BHK21 yang dikultur dalam suspensi penuh, sel MDCK; dan sel Vero, sel PK, sel ST, sel Marc145, dll. dengan bantuan kultur suspensi microcarrier, setiap sel memiliki karakteristik yang berbeda.
Sel suspensi
Sel suspensi "thp-1" 200x
Secara umum, sel suspensi lebih mudah ditangani daripada sel yang melekat karena tidak diperlukan trypsinization untuk melewati sel suspensi. Tetapi ini tidak berarti bahwa sel suspensi lebih mudah tumbuh daripada sel yang melekat. Untuk pemula, ini lebih menantang. Selalu ada berbagai masalah: misalnya, mengapa sel mati dan diferensiasi sel selalu muncul; disepakati bahwa bagian itu mudah, tetapi hasilnya akan berbeda; masalah muncul lagi setelah kriopreservasi dan pemulihan!
Selanjutnya, mari kita bahas beberapa poin penting tentang kultur sel suspensi~
Poin 1: Kesabaran yang cukup, itu sangat diperlukan
Banyak sel suspensi memiliki viabilitas yang relatif buruk ketika baru saja pulih dari kriopreservasi. Saat ini, kita harus cukup sabar untuk menunggu sel menyelesaikan perbaikan sendiri dan memasuki fase pertumbuhan logaritmik. Misalnya, THP-1 (leukemia monositik manusia) seringkali membutuhkan 7-10 hari masa pemulihan dari pencairan hingga proliferasi normal; Jurkat, Klon E6-1 (sel leukemia limfositik T manusia) juga membutuhkan 5-7 hari setelah pemulihan. Kembali ke keadaan sebelum beku. Pemula mungkin berhenti berlatih selama periode ini, jadi harap bersabar! Menumbuhkan sel-sel seperti itu juga merupakan proses menumbuhkan kesabaran!
Butir 2: Pahami kerapatan inokulasi
Secara umum, kepadatan sel suspensi tidak boleh lebih rendah dari 500,000/ML. Banyak sel suspensi bergantung pada kepadatan, dan non-proliferasi yang disebabkan oleh kepadatan rendah juga merupakan salah satu masalah umum bagi pemula. Tentu saja, sangat sedikit sel yang keadaannya menjadi lebih buruk ketika kepadatannya tinggi, seperti W6/32 (sel hibridoma sel B tikus). Oleh karena itu, sangat penting untuk mencari informasi yang relevan untuk memahami karakteristik sel sebelum membiakkan sel yang tidak diketahui. Hanya dengan mengenal diri sendiri dan musuh Anda dapat memenangkan semua pertempuran!
Frekuensi penggantian media tidak boleh dibatasi pada "jelas". Sel adalah makhluk hidup. Selama siklus kultur berkelanjutan, nutrisi spesifik seperti media tambahan dan glukosa dapat ditambahkan beberapa kali tergantung pada status pertumbuhan sel untuk mempertahankan status pertumbuhan sel yang baik. . Selama proses kultur suspensi, dengan proliferasi sel, konsumsi nutrisi dalam media asli dan peningkatan metabolit, kelangsungan hidup sel akan menurun, dan suplemen nutrisi yang tepat waktu akan membuat sel berada di lingkungan hidup yang relatif baik. Saya tidak akan membahas detailnya di sini, dan menghindari seringnya sentrifugasi dan penggantian cairan.
Mari kita bicara tentang metode penggantian cairan:
①Metode pertukaran cairan penuh sentrifugal
Artinya, hapus semua media lama dengan sentrifugasi (800-1000rpm, 5 menit), dan ganti dengan media baru. Metode ini cocok untuk penggantian media sel suspensi "padat kulit" yang diangkat dengan baik (seperti K562), atau situasi saat ini di mana sel berada dalam kondisi baik dan kepadatan tinggi, menghasilkan konsumsi media yang besar. Keuntungan dari metode ini adalah media diubah secara menyeluruh dan beberapa puing sel dapat dihilangkan, tetapi juga akan menyebabkan kerusakan mekanis pada sel pada tingkat tertentu.
②Metode pertukaran setengah sentrifugal
Artinya, dengan sentrifugasi (800-1000rpm, 5 menit) suspensi sel 50 persen, ganti 50 persen volume media segar. Metode ini cocok untuk membandingkan sel "munafik" yang sulit dikultur (seperti thp-1), atau situasi di mana kepadatannya rendah tetapi lebih banyak kotoran perlu dihilangkan dalam keadaan penyesuaian.
③Metode pertukaran cairan sedimentasi
Artinya, alih-alih menggunakan centrifuge, metode sedimentasi alami dengan gravitasi digunakan untuk memisahkan media dari sel, sehingga dapat menggantikan semua atau sebagian media segar. Namun, aplikasi ini memiliki keterbatasan—hanya cocok untuk sel yang dapat membentuk kelompok sel dengan ukuran tertentu (jika tidak, mereka tidak dapat menetap secara alami dan hanya dapat disentrifugasi dengan kecepatan rendah), terutama ketika berhadapan dengan sel yang mengandalkan agregasi sel untuk berkembang biak. , seperti NK-92, NK- 92 MI, Jurkat. Metode ini dapat meminimalkan kerusakan mekanis yang disebabkan oleh proses sentrifugasi selama proses pertukaran cairan, dengan tetap mempertahankan agregat massa sel, dan pembuangan sel-sel yang relatif menyeluruh.
Setelah menguasai poin-poin di atas, ditambah benih sel yang bagus, tinggal menunggu waktu untuk menumbuhkan sel suspensi yang "indah"!
piring kultur sel
Pelat kultur sel berbentuk U Yongyue Medical sebagian besar digunakan untuk membiakkan sel suspensi, menggunakan polistiren (PS) tingkat medis, diproduksi di bengkel pemurnian tingkat 100,000-, disterilkan dengan penyinaran, bebas dari DNase, RNase, dan pirogen -gratis, Keselamatan dan perlindungan lingkungan.
Pelat kultur sel tersedia dalam berbagai spesifikasi untuk memenuhi kebutuhan berbagai kultur bakteri. Jenis produk dibagi menjadi 6-well, 12-well, 24-well, 48-well, 96-well, dan 384-well, of sumur mana 96-dibagi menjadi alas datar, alas U, alas V bawah; Pelat kultur berbentuk U sebagian besar digunakan untuk membiakkan sel suspensi; Pelat kultur berbentuk V sebagian besar digunakan untuk percobaan hemaglutinasi imunologi.