Reaksi berantai polimerase (PCR) adalah salah satu metode yang paling terkenal di laboratorium ilmu kehidupan.
Pelat PCR terbuat dari plastik kelas satu untuk penanganan dan analisis sampel atau hasil yang dikumpulkan dengan sangat baik.
Mereka memiliki dinding tipis dan seragam yang memberikan perpindahan panas yang tepat.
Dalam persiapan untuk aplikasi waktu nyata, sebagian kecil DNA atau RNA diisolasi dan disimpan dalam pelat PCR.
Pelat PCR sangat efisien dalam menyegel panas dan juga membatasi aliran panas.
Namun, karena pelat PCR efisien dan andal, pelat tersebut rentan terhadap kesalahan dan ketidakakuratan saat memproses sampel.
Jadi jika Anda tertarik untuk mendapatkan plat PCR yang berkualitas baik. Yang terbaik adalah menghubungi produsen pelat PCR yang andal. Dengan ini, Anda dapat yakin untuk mendapatkan harga terbaik.
Di bawah ini adalah beberapa tindakan pencegahan untuk menghindari kontaminasi reagen atau sampel dan untuk mencegah hasil yang tidak akurat.
Disinfeksi lingkungan
Hasil positif atau negatif yang salah karena adanya kotoran dapat membuat Anda meragukan hasilnya.
Kotoran dan kontaminan datang dalam berbagai bentuk, seperti DNA yang tidak terkait atau bahan tambahan kimia, yang pada akhirnya mengurangi efisiensi dan efektivitas reaksi.
Ada banyak cara untuk mengurangi tingkat kontaminasi pelat PCR.
Menggunakan ujung filter yang disterilkan adalah cara lain yang berguna untuk mencegah masuknya kotoran ke dalam sampel melalui pipet.
Seperangkat peralatan yang benar-benar bersih, termasuk pipet dan rak, disediakan khusus untuk penggunaan PCR. Ini akan menjamin transfer kotoran atau kontaminan yang dapat diabaikan di sekitar laboratorium.
Gunakan pemutih, etanol pada pipet, rak, dan bangku untuk membersihkan kontaminasi.
Alokasikan ruang yang disediakan untuk semua reaksi PCR untuk mengurangi kontaminasi partikel lebih lanjut.
Gunakan sarung tangan bersih di setiap langkah dan sering-seringlah menggantinya.
pelat PCR
Periksa konsentrasi dan kemurnian template.
Kebersihan bangku dan peralatan yang digunakan untuk menganalisis sampel menggunakan PCR harus dijaga. Sangat penting untuk memverifikasi kemurnian sampel sebelum analisis dan pemrosesan.
Biasanya, penganalisis memperhitungkan tingkat konsentrasi dan kemurnian sampel DNA.
Rasio absorbansi 260nm/280nm tidak boleh kurang dari 1,8. Pengotor kemudian diidentifikasi menggunakan panjang gelombang antara 230nm dan 320nm.
Dalam satu contoh, garam chaotropic dan senyawa organik lainnya terdeteksi pada absorbansi 230 nm. Secara bersamaan mendeteksi dan memverifikasi kekeruhan dalam sampel DNA pada absorbansi pada 320nm.
Hindari membebani pelat dan produk PCR secara berlebihan
Meskipun diinginkan untuk menjalankan beberapa produk pada saat yang sama, hal ini dapat menyebabkan kontaminasi silang pada pelat PCR.
Membebani pelat PCR secara berlebihan dengan produk yang berbeda merupakan pemborosan dan mempersulit identifikasi sampel.
Simpan catatan alikuot reagen PCR
Siklus pembekuan/pencairan terus-menerus dan penggunaan alikuot yang sering dapat merusak reagen PCR, enzim, dan DNTP melalui rekristalisasi.
Selalu berusaha untuk memantau tingkat alikuot yang digunakan saat menyiapkan sampel untuk analisis.
LIMS yang disukai lebih cocok untuk mengendalikan stok dan jumlah reagen dan sampel yang akan dibekukan atau dicairkan.
Pilih suhu anil optimal.
Memilih dan menggunakan suhu anil yang salah adalah cara lain hasil PCR mengandung kesalahan.
Terkadang respons tidak berjalan sesuai rencana. Suhu anil perlu diturunkan untuk mendorong reaksi yang berhasil.
Namun, menurunkan suhu meningkatkan kemungkinan positif palsu dan dimer primer.
Saat menggunakan pelat PCR, penting untuk mengkonfirmasi analisis kurva leleh karena merupakan indikator yang baik untuk memilih suhu anil yang tepat.
Perangkat lunak desain primer membantu desain, memberikan suhu anil yang benar, secara langsung mengurangi kesalahan pada pelat PCR.
piring pcr
