Media kultur sel adalah dasar nutrisi untuk meniru lingkungan pertumbuhan in vivo sel hewan secara artifisial dan mempertahankan kelangsungan hidup dan proliferasi sel in vitro. nutrisi. Lalu apa saja permasalahan umum yang dihadapi dalam penggunaan media kultur sel? Mari kita lakukan analisis.
1. Pemilihan sistem buffer dan perubahan pH medium kultur sel
Karena pH optimum untuk sebagian besar sel adalah antara 7.0 dan 7,4, penyimpangan dari rentang ini mungkin memiliki efek buruk pada pertumbuhan sel. Namun, persyaratan pH berbagai sel tidak persis sama. Sel biakan primer umumnya memiliki toleransi yang buruk terhadap fluktuasi pH, sedangkan garis sel tak terbatas memiliki toleransi yang kuat. Oleh karena itu, dalam kultur primer, sistem penyangga dalam media kultur lebih penting. Media kultur sel umum menggunakan sistem garam seimbang, tetapi media kultur yang berbeda atau rangkaian media kultur yang sama menggunakan sistem garam seimbang yang berbeda. Misalnya, seri 199 dan seri MEM semuanya memiliki media kultur sistem Hanks dan kultur sistem Earle. basis. Beberapa media bukan sistem garam seimbang konvensional yang disebutkan di atas, seperti media RPMI1640, media F12. Sistem garam seimbang dari media serum rendah MEM juga bukan sistem garam seimbang konvensional, dan kapasitas penyangga sistem garam seimbang lebih kuat daripada sistem garam seimbang konvensional.
budaya sel
Ada banyak alasan penurunan pH selama kultur sel. Ketika sel tumbuh sangat cepat, nilai pH biasanya turun dengan cepat, yang dapat diatasi dengan pasase tepat waktu, meningkatkan rasio pasase, atau mengurangi volume serum. Selain itu, tutup botol kultur yang terlalu rapat, kapasitas penyangga yang tidak mencukupi dari sistem buffer NaHCO3, konsentrasi garam yang salah dalam media kultur, kontaminasi bakteri, ragi atau jamur juga dapat menyebabkan pH sering turun dengan cepat. Saat ini, Anda dapat mengatasinya dengan cara berikut:
1) Tingkatkan konsentrasi NaHCO3 dalam media kultur atau kurangi konsentrasi CO2 dalam inkubator. Ketika kandungan NaHCO3 antara 2.0 g/L dan 3,7 g/L, konsentrasi CO2 yang sesuai adalah 5~10 persen ;
2) Beralih ke media kultur CO2-independen;
3) Kencangkan tutup botol dengan benar. Tambahkan buffer HEPES ke media kultur untuk membuat konsentrasi akhir 10-25 mM;
4) Gunakan larutan kultur berdasarkan garam Earle di lingkungan kultur CO2, dan gunakan larutan kultur yang disiapkan oleh garam Hanks di lingkungan kultur atmosfer;
5) Buang biakan atau sterilkan dengan antibiotik jika penyebabnya adalah kontaminasi.
2. Beberapa aditif penting yang umum digunakan dalam media kultur sel dan masalah yang harus diperhatikan dalam proses penggunaannya
Fenol merah digunakan sebagai indikator pH dalam media kultur sel. Secara umum, nilai pH media dapat dinilai dengan efek indikator fenol merah, tetapi kandungan fenol merah dalam media kultur sel rendah serum atau bebas serum berbeda dengan media kultur sel biasa, dan tidak dapat diamati. dengan mata telanjang atau Nilai pH ditentukan secara empiris, dan disarankan untuk menggunakan pH meter untuk pengukuran. Fenol merah biasanya tidak memiliki efek signifikan pada kualitas produk biologis yang dihasilkan dalam media kultur sel yang mengandung serum, dan juga dapat dihilangkan dengan teknik pemurnian, tetapi fenol merah dapat menyebabkan ketidakseimbangan natrium/kalium intraseluler dalam media kultur sel bebas serum. , mempengaruhi pertumbuhan sel.
piring kultur sel
Natrium bikarbonat terutama digunakan sebagai sistem penyangga dalam media kultur sel, dan juga memiliki efek mengatur tekanan osmotik. Biasanya jumlah natrium bikarbonat yang disarankan dalam petunjuk penggunaan produk adalah jumlah yang standar dan aman, yang diperoleh berdasarkan pengalaman praktis secara ilmiah. Namun, karena garis sel yang berbeda (strain), sel yang sama dapat beradaptasi dengan lingkungan yang berbeda (toleransi sel berbeda, dll.), Dan ada perbedaan regional dalam kualitas air, dll., Yang juga dapat sedikit dimodifikasi dalam produksi aktual proses, tetapi penggunaan Mereka yang perlu melakukan tes yang sesuai (tes fisikokimia dan produksi sel, dll.).
HEPES adalah buffer non-ionik dengan kapasitas buffer yang baik pada kisaran pH 7,2 hingga 7,4, dan mungkin beracun bagi beberapa sel pada konsentrasi tinggi. Buffer HEPES dapat digunakan dengan natrium karbonat tingkat rendah (0.34g/L) untuk mengimbangi peningkatan tekanan osmotik yang disebabkan oleh penambahan HEPES tambahan. Kisaran konsentrasi amannya adalah 10 ~ 25mmol/L.
Natrium piruvat dapat digunakan sebagai sumber karbon alternatif dalam kultur sel, dan meskipun sel lebih menyukai glukosa sebagai sumber karbon, sel juga dapat memetabolisme natrium piruvat tanpa adanya glukosa.
Glutamin sangat tidak stabil dalam larutan. Itu dapat terurai hingga 50 persen pada 4 derajat selama 1 minggu. Yang terbaik adalah menyiapkannya secara terpisah saat digunakan, simpan di lemari es -20 derajat, dan tambahkan ke media kultur sel sebelum digunakan.
