Media kultur sel harus mengandung nutrisi yang cukup untuk memenuhi zat dan energi yang dibutuhkan untuk reaksi biokimia seperti sintesis sel baru dan metabolisme sel. Komponen utama media kultur sel adalah air, asam amino, vitamin, karbohidrat, garam anorganik, dan nutrisi tambahan lainnya. Oleh karena itu, kita harus memperhatikan metode sterilisasi media kultur sel dan tindakan pencegahan terkait dalam percobaan sehari-hari.
budaya sel
1. Metode sterilisasi dan tindakan pencegahan untuk media kultur sel yang berbeda
Metode sterilisasi media kultur sel dibagi menjadi sterilisasi autoklaf dan sterilisasi filtrasi membran. Media kultur yang berbeda mungkin memiliki metode sterilisasi yang berbeda karena nutrisi yang berbeda.
Autoklaf
Beberapa media, seperti MEM, dapat diautoklaf, media ini umumnya tidak mengandung L-glutamin dan natrium bikarbonat, dan umumnya ditambahkan setelah media diautoklaf. Selain itu, glutamat bertekanan tinggi (seperti L-alanyl-L-glutamine) dapat digunakan sebagai pengganti L-glutamine. Media yang dapat diautoklaf sepenuhnya disterilkan dengan kehilangan nutrisi minimal pada suhu 121 derajat , 15 psi, dan 15 menit, tanpa memperpanjang waktu sterilisasi.
Sebagian besar media kultur sel tidak cocok untuk autoklaf. Karena media kultur sering mengandung vitamin, protein, polipeptida, faktor pertumbuhan dan zat lainnya, zat ini rentan terhadap denaturasi atau hilangnya fungsi di bawah suhu tinggi atau paparan radiasi, sehingga cairan tersebut di atas sebagian besar disaring dan disterilkan untuk menghilangkan bakteri. Ada banyak membran filter yang tersedia untuk filtrasi dan sterilisasi, dan bahannya sebagian besar adalah PES, nilon, polikarbonat, selulosa asetat, nitroselulosa, PTFE, keramik, dll. Sterilisasi filtrasi membran adalah metode yang umum digunakan dan nyaman saat ini. Membran filter dengan ukuran pori 0.2 μm sering digunakan, dan beberapa menggunakan ukuran pori 0.1 μm. Dibandingkan dengan filtrasi tekanan tinggi, membran memiliki masa hidup dan lebih mahal, tetapi kurang merusak nutrisi dalam media kultur sel.
2. Tindakan pencegahan selama penyimpanan media kultur sel yang berbeda
Umumnya, media biakan sel cair tidak boleh dibekukan pada -20 derajat , karena nutrisi dapat mengendap selama pencairan, yang akan memengaruhi efek biakan. Dalam keadaan normal, itu harus disimpan pada 2 ~ 8 derajat dari cahaya. Sebelum digunakan, keluarkan dari lemari es dan letakkan pada suhu kamar untuk keseimbangan. Media cair biasa berlaku selama 6 hingga 12 bulan. Cobalah untuk menghindari penyimpanan jangka panjang media kultur sel cair. Glutamin yang ada di dalamnya akan terurai secara perlahan seiring dengan perpanjangan waktu penyimpanan. Jika pertumbuhan sel kurang baik, Anda dapat mempertimbangkan untuk menguji kandungan glutamin dalam media untuk menentukan apakah akan menambahkan glutamin. . Media kultur sel cair yang tersedia secara komersial memiliki tanggal kedaluwarsa tertentu. Setelah menggunakan media kultur sel bubuk kering untuk menyiapkan cairan, juga harus disimpan pada suhu rendah (2 ~ 8 derajat). Selain degradasi glutamin yang mudah dalam medium, komponen lain dalam medium juga dapat terdegradasi atau diendapkan dengan meningkatnya suhu.
