Untuk cawan petri beralas kaca biasa yang ada di pasaran, biasanya dibuat lubang di dasar cawan petri plastik, kemudian kaca penutup atau sel kaca dengan ketebalan 170-220 μm direkatkan ke dasar cawan petri. cawan petri dengan lem tanpa bayangan atau gel silika. Tidak seluruh bagian bawah cawan petri terbuat dari kaca. Area yang cocok untuk observasi hanya di area perforasi. Namun, karena hidrofobisitas kaca, saat membiakkan sel, sel tidak dapat menempel dengan baik pada kaca, dan kondisi pertumbuhannya tidak baik, dan bahkan fenomena delaminasi sel terjadi selama pencitraan pemindaian confocal.
Agar sel dapat melekat dengan baik, perlu dipastikan bahwa reagen protein spesifik telah dilapisi sebelum menggunakan cawan dasar kaca untuk kultur sel.
selimut do-it-yourself
Kultur sel yang berbeda membutuhkan reagen pelapis yang berbeda. Pada saat yang sama, karena protein yang digunakan untuk pelapis adalah produk biologis, kemurnian produk dan dosis protein pelapis dari perusahaan yang berbeda juga berbeda. Posting teknis ini hanya untuk referensi. Dosis khusus reagen pelapis harus mengacu pada petunjuk merek yang digunakan. . Dan yang terbaik adalah melakukan percobaan gradien dengan reagen yang Anda gunakan untuk menemukan konsentrasi lapisan yang paling sesuai.
Berikut adalah contoh Poli-L-Lysine (PLL, sigma, P4832, 100ug/ml):
Lapisan PLL cocok untuk sebagian besar sel, terutama untuk kultur neuron di sistem pusat. Kandungan protein (ug/cm2) per satuan luas perlu dibuat untuk mencapai jumlah yang diinginkan selama penggunaan. Jumlah lapisan yang disarankan untuk PLL dalam contoh ini adalah 2 ug/cm2. Perlu untuk menghitung jumlah protein yang dibutuhkan sesuai dengan luas lapisan dan volume lapisan.
Misalnya: cawan petri bawah kaca 35mm, area pertumbuhan sel adalah 3,5cm2, area pelapisan adalah 4,1cm2, dan volume larutan pelapis adalah 400ul, maka dosis yang dianjurkan adalah 2ug/cm2. Maka dibutuhkan 8,2 ug PLL dalam satu sumur. Jika hanya ditambahkan 400 ul larutan PLL, konsentrasi larutan PLL adalah 20,5 ug/ml (sekitar 20 ug/ml). Oleh karena itu, larutan stok perlu diencerkan dengan air ultra murni.
Langkah spesifik:
1. Encerkan larutan stok PLL 1:5 dengan air ultra murni.
2. Tambahkan 400 ul pengenceran PLL ke setiap cawan petri dasar kaca 35 mm.
3. Inkubasi selama 1-2 jam pada suhu kamar dan aspirasi pengenceran PLL.
4. Cuci dengan hati-hati 3 kali dengan 2 ml larutan PBS atau media bebas serum, dan aspirasikan larutan pencuci.
5. Langsung tambahkan suspensi sel untuk budidaya.
Evaluasi metode
Karena sifat yang berbeda dari berbagai protein pelapis, protein pelapis yang berbeda digunakan dengan cara yang berbeda. Kontaminasi baru sering tercipta karena kebutuhan untuk melapisi piring dengan dasar kaca. Selain itu, kontaminasi sering ditemukan setelah sel dinaikkan, yang tidak hanya menunda waktu, tetapi juga membuang bahan habis pakai kit. Lagi pula, reagen protein berlapis dan cawan dengan dasar kaca yang terjamin kualitasnya mahal (piring dengan dasar kaca dengan kualitas buruk dapat bocor karena lemnya tidak lengket atau lem yang digunakan beracun bagi sel).
Cawan Petri confocal tanpa lapisan
Untuk anak-anak yang ingin menghemat waktu dan tenaga, akan lebih mudah menggunakan hidangan budaya confocal tanpa pelapis.
Faktor-faktor yang perlu dipertimbangkan saat memilih cawan biakan yang cocok adalah: apakah cocok untuk dipatuhi oleh sel Anda sendiri, apakah karakteristik optik cawan biakan memenuhi persyaratan confocal.
Cawan petri yang memenuhi persyaratan faktor di atas tidak terbatas pada cawan dasar kaca yang dilapisi. Faktanya, semua orang tahu bahwa piring plastik lebih murah dan lebih mudah ditempeli sel daripada kaca. Berikut adalah contoh cawan kultur confocal dari Shanghai Jingan, untuk berbicara tentang parameter yang harus dimiliki cawan kultur yang cocok untuk eksperimen confocal:
Dapat dilihat bahwa parameter fisik cawan kultur confocal yang memenuhi persyaratan penggunaan langsung sangat mirip dengan kaca, tetapi pada saat yang sama, mereka juga memiliki sifat hidrofilik, yang dapat membuat sebagian besar sel melekat lebih baik; dan keuletan lebih baik daripada kaca. Ini memungkinkan sebagian besar garis sel dan sel primer menempel langsung ke dinding, dan tidak rapuh, yang merupakan pilihan yang baik.
Anda juga dapat menemukan cawan kultur confocal yang paling cocok untuk eksperimen Anda sesuai dengan persyaratan eksperimen khusus Anda dan parameter dalam tabel di atas.
Evaluasi metode
Memilih cawan petri jenis ini tidak memerlukan lapisan tambahan, sangat mengurangi risiko kontaminasi. Dan karena bagian bawah plastik lebih mudah untuk dikerjakan, tidak diperlukan lem untuk memasangnya ke bagian bawah cawan petri. Hilangkan kemungkinan kebocoran atau sitotoksisitas.
